Nina Hartley nasceu Marie Louise Hartman em 11 de março de 1959, em Berkeley, Califórnia. Depois de se formar na Berkeley High School em 1977, Nina frequentou a escola de graduação em enfermagem da San Francisco State University e se formou em 1985. Sua carreira na indústria do entretenimento adulto começou quando ela estava no segundo ano da escola de enfermagem, quando começou a trabalhar como stripper no Mitchell Brothers O'Farrell Theatre em San Francisco, Sua estreia no cinema adulto veio em Educating Nina (1984), que foi produzido e dirigido pela veterana estrela pornô Juliet Anderson, mais conhecida como "Tia Peg". Em 1997, Nina apareceu em Boogie Nights (1997) interpretando a esposa em série infiel de William H. Macy.
