Nascida e criada em Dallas, Texas, onde se formou na High School Highlands Lake, Amy Acker é a mais velha de quatro filhos; ela tem duas irmãs e um irmão. Especialista em atuação na Universidade Metodista do Sul, Amy atuou em várias produções de teatro universitário. Ela apareceu em vários papéis durante os segmentos de fantasia para a popular série de TV infantil Wishbone (1995), que foi filmada no Texas e consistia em atores de teatro de Dallas. Após a formatura, ela trabalhou em Wisconsin e Nova York antes de ganhar o papel de "Fred" em Angel (1999).
