John Yohan Cho nasceu em Seul, na Coreia do Sul, e se mudou para Los Angeles, Califórnia ainda criança. Seu pai era um ministro cristão. Cho foi educado na Herbert Hoover High School em Glendale, antes de ir para a Universidade da Califórnia em Berkeley, onde estudou literatura inglesa. Após a formatura, ele voltou para Los Angeles, trabalhando por um tempo como professor na Pacific Hills School. Ele também começou a atuar na famosa companhia de teatro asiático-americana East West Players.
A carreira de ator no cinema começou com pequenos papéis em projetos como Wag the Dog (1997), Bowfinger (1999) e o favorito da crítica Better Luck Tomorrow (2002). Sua descoberta veio quando ele apareceu na comédia adolescente American Pie (1999) e ajudou a cunhar a frase "MILF". Outros papéis se seguiram, e ele marcou outro sucesso na comédia vagabunda Harold & Kumar Go to White Castle (2004). Cho também estrelou a franquia de enorme sucesso Reinício de Star Trek (2009), no papel de Hikaru Sulu, e continuou trabalhando continuamente em Hollywood, estrelando no drama independente Columbus (2017), o thriller Searching (2018) e o filme de terror The Grudge (2020). Além de atuar, Cho também é cantora e se apresenta na banda Viva La Union.
Ele é casado com a atriz Kerri Higuchi e têm dois filhos.
