Ana de la Reguera cresceu no estado tropical de Veracruz, na costa do Golfo do México. Ela começou seus estudos de artes performáticas no Instituto Cultural de Veracruz, depois foi para o Centro de Educação Artística da Televisa (CEA) e o instituto artístico da TV Aztecas (CEFAC) na Cidade do México, mais tarde estudou com Lisa Robertson e Aaron Spicer em Los Angeles e treinador interino Juan 'Carlos Corzza na Espanha. No teatro, ela participou de "El Cartero" ("Il Postino") pelo qual recebeu dois prêmios: um de "Melhor Atriz" da Associação de Jornalistas de Teatro do México e outro de "Atriz Mais Promissora" do ano da Associação de críticos de teatro e jornalistas.
A carreira profissional de De la Reguera começou com seu papel na novela Azul (1996), seguida por Pueblo chico, infierno grande (1997) - pelo qual recebeu o Prêmio Heraldo de "Melhor Atriz Revelação" - e Desencuentro (1997) , que foi sua terceira novela sob a direção do internacionalmente reconhecido Ernesto Alonso._ "Tentaciones" (1998) _ marcou seu início com a poderosa Argos Comunicación.Imediatamente recebeu a oferta de papéis em _ "Destino" (1998) _ e Todo por amor (2000), pelos quais recebeu o Prêmio Palma de Ouro."Depois disso, foi um trabalho ininterrupto para de la Reguera.Em 2002 estrelou Cara o Cruz (2001), primeira novela coproduzida por Argos Comunicación e Telemundo, feita exclusivamente para o público hispânico residente nos Estados Unidos.No ano seguinte, interpretou María na novela Por tí (2002) para a TV Azteca e na minissérie que se seguiu a Pedro el escamoso (2001), Como Pedro por su casa (2003), que foi uma coprodução de colombianos Caracol e Telemundo.Além disso, de la Reguera também teve o papel principal na novela peruana Luciana y Nicolás (2003).
A introdução de De la Reguera no cinema começou com Dust to Dust (2000), que lhe rendeu duas indicações: "El Heraldo de la Revelación Femenina" (Melhor Nova Atriz) e "Eres Mejor Actriz" (Melhor Atriz). Mais tarde, ela atuou em A Beautiful Secret (2002) com a indicada ao Oscar Katy Jurado. Em 2003, Ana estrelou a aclamada comédia Noite das Mulheres (2003), ao lado de Ana Claudia Talancón. O filme se tornou o sucesso de bilheteria do ano e ganhou três prêmios importantes: "Prêmio de Atriz Favorita da MTV da América Latina", Prêmio da indústria cinematográfica mexicana de Melhor Atriz do Ano, "CANACINE" e "Diosa de Plata (Silver Godess) Award "de Melhor Atriz Coadjuvante (2003).
Em 2005, ela estrelou Gitanas (2004), que foi ao ar na Telemundo nos Estados Unidos e agora já foi vista em lugares distantes como Ucrânia, Espanha e Argentina. Em 2006, de la Reguera liderou o poderoso On the Edge (2006), que lhe rendeu seu segundo prêmio "Diosa de Plata [Deusa de Prata]" de melhor atriz. Além disso, ela também estrelou em Paraiso Travel (2008), interpretando o papel de Milagros, cantando e dançando pela primeira vez em um filme. John Leguizamo e a estrela colombiana Margarita Rosa de Francisco também estavam no elenco. O filme foi exibido no Tribeca Film Festival e posteriormente lançado nos Estados Unidos e na América Latina. Naquele mesmo ano, Ana teve sua grande chance no cinema americano ao fazer o papel da Irmã Encarnación na comédia Nacho Libre (2006). O filme de Jared Hess - diretor de Napoleon Dynamite (2004) - e coestrelado por Jack Black deu a ela a oportunidade de ser vista em todo o mundo.
Em 2008, ela se tornou o novo rosto da Cover Girl em todo o mundo, ao lado de celebridades como Drew Barrymore, Queen Latifah, Ellen DeGeneres e Rihanna. A partir daí sua carreira recebeu muitos outros endossos impressionantes, incluindo campanhas com Pantene, Special K e Flip, Macy's, Coca-Cola (Ciel), Pepsi (Be Light) e Caress, entre muitos outros. Ela começou 2010 com uma campanha publicitária mundial para Lipton Tea ao lado do ator Hugh Jackman. Mais recentemente, ela fez uma campanha internacional com Kahlúa beneficiando sua cidade natal de Veracruz, no México, demolida após a ressentida destruição de Huricaine Karl.
No filme de ação-thriller Sultanes del Sur (2007), rodado principalmente na Argentina, ela interpreta Monica Silvari, uma ladrão de banco mesquinha e sofisticada ao lado dos atores espanhóis Jordi Mollà e Tony Dalton. Na primavera de 2008, Ana começou a filmar Capadocia (2008), um programa de megaprodução da HBO sobre a vida caótica e miserável em uma prisão feminina no México. O programa foi ao ar com recordes de audiência no México e na América Latina, e foi lançado nos Estados Unidos no outono de 2008 pela HBO OLE. Três dos diretores mais reconhecidos da América Latina participaram desta produção original da HBO: Epigmenio Ibarra, Jorge Aragón e Luis Peraza. A série de sucesso obteve três indicações ao Emmy Internacional em sua primeira temporada, e este outono marcou a abertura da segunda temporada de "Capadocia".
Em 2009 ela filmou Di Di Hollywood (2010) do famoso Jamón, o diretor de Jamón (2000) Bigas Luna. Nesse mesmo ano, ela voltou ao teatro mexicano por seis meses, onde interpretou "Desdêmona" em William Shakespeare "Othello". A peça teve um enorme sucesso no renomado teatro mexicano Juan Ruiz de Alarcón, e ela foi eleita "Melhor Atriz" pela Journalist Theatre Association no anual Bravo Awards e pela ACTP. Ainda naquele ano, ela filmou o comovente filme mexicano Backyard (2009), no qual interpretou um policial em uma cidade fronteiriça fora da lei controlada por traficantes de drogas e assassinos. Dirigido por Carlos Carrera (O Crime do Padre Amaro (2002), indicado ao Oscar de "Melhor Filme Estrangeiro"), o filme foi escolhido para representar o México no Oscar 2010 na categoria Melhor Filme Estrangeiro, e ganhou de la Reguera o "Prêmio de Melhor Atriz" no Imagen Awards e no CANACINE Awards, e ganhou a "Placa de Prata" no Festival de Cinema de Chicago.
O início de 2010 trouxe a estréia de seu filme de Hollywood, Cop Out (2010), coestrelado por Bruce Willis e Tracy Morgan e dirigido por Kevin Smith. Ela interpretou Gabriela, uma mulher obstinada com uma linguagem muito picante e colorida, que é resgatada por Willis e Tracy - e os coloca em apuros no processo. Nesse mesmo ano estreou o filme Hidalgo - La historia jamás contada. (2010), sobre a polêmica vida do herói da independência do México, o padre Miguel Hidalgo. Ela interpreta a segunda esposa de Hidalgo e divide o crédito com Demián Bichir (Weeds (2005), Che: Part One (2008)).
Nos Estados Unidos, ela também teve um papel recorrente na série Royal Pains (2009) da USA Network, e estrelou a aclamada comédia da HBO, produzida por Will Farrell, Eastbound & Down (2009), coestrelada por Danny McBride como deprimido jogador de beisebol e interesse amoroso Kenny Powers. Ela também teve um papel em Cowboys & Aliens (2011), dirigido por Jon Favreau, estrelado por Harrison Ford, Daniel Craig e Sam Rockwell, produzido por Steven Spielberg, Ron Howard e Brian Grazer. O filme cruza o clássico faroeste com o filme de invasão alienígena em sua história sobre um cowboy solitário liderando uma revolta contra alienígenas assassinos do espaço sideral. Ana também interpretou uma enfermeira no drama adolescente Everything, Everything (2017) e, em 2021, estrelou dois filmes de ação e terror, Army of the Dead (2021) e The Forever Purge (2021).
Como se sua ocupada carreira de atriz não bastasse, de la Reguera também está fortemente envolvida com trabalhos de caridade.Mais recentemente, ela carregou um vídeo no YouTube para ajudar a aumentar a conscientização sobre Veracruz, seu estado natal, afetado por fortes chuvas e um devastador furacão Karl.No vídeo, ela fala sobre uma variedade de opções de apoio e ajuda que as vítimas do furacão podem utilizar e oferece métodos para fazer doações.A campanha viral espalhou-se por todo o Twitter e outros sites online, arrecadando o dinheiro tão necessário para as vítimas do furacão.Ela também fundou a organização VeracruzANA AC, que é uma organização filantrópica cuja missão é arrecadar fundos e construir uma avenida turística de Antígua - algo que vem sendo prometido por organizações políticas há anos.Antígua é uma das comunidades mais importantes e históricas de Veracruz e também uma das áreas mais afetadas pelo furacão.O mês de junho marcou o ponto culminante de seu árduo trabalho e a grande cerimônia de inauguração do bulevar turístico.
